分裂酵母情報
分裂酵母の研究で必要な基礎情報をのせます。
菌株について
株の名前 | 遺伝子型 | 由来など | 入手日 |
Sp286 | h+/h+ ade6-M210/ade6-M216*1 ura4-D18/ura4-D18*2 leu1-32/leu1-32 | BIONEER, 破壊株コレクションホスト | 2007.10 |
972h | h- | 千葉大学松浦氏, 野生株 | 2006.8 |
FY254 | h- ura4-D18 leu1-32 ade6-M210 can1-1 | ATCC | 2007.8 |
FY7652 | h- leu1-32 ura4-D18 | NRBP | 2006.11 |
FY7549 | h- leu1 ura4 | NRBP | 2006.11 |
FY6955 | h- leu1 ura4-D18 | NRBP | 2006.11 |
FY7054 | h+N ade6-M210 his5-303 leu1-32 lys1-131 ura4-D18 | NRBP | 2006.11 |
OM2 | h- leu1-32 | 千葉大学松浦氏 | 2006.8 |
JY741 | h- ura-D18 leu1 ade6-M216 | 千葉大学松浦氏, growthが遅い | 2006.8 |
JY746 | h+ ura-D18 leu1 ade6-M210 | 千葉大学松浦氏 | 2006.8 |
プラスミドについて
Pombeのプラスミドについて、Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology PartAのPombeの章やこのForsburgのページと文献1*3に書いてあることをまとめると、
複製起点と安定性について
- 出学酵母の2ミクロンDNAは使えるが、安定に保持されない(脱落する)。
- Pombeのars1を持つプラスミド(pSP2など)の方がすこし安定に保持される*4。
- stbというよくわからないDNA elementを持つプラスミド(pFL20) はかなり安定に保持される*5。
- ars3002をタンデムに持ったプラスミド(pDblet)はかなり安定に保持される*6。
多量体化について
- pDbletは2量体が多少見られる、pFL20は多量体は見られない、pSP2は多量体化することがある*7。
マーカー遺伝子について
- Sc_LEU2はSp_leu1をよわく相補
- Sc_URA3はSp_ura4をとても弱く相補
- ura4-DS/E*8
- ura4D-18*9
プロトコル
- ランダムスポア解析
The RSA protocol is simple: Using a three day old cross check for the presence of asci under the light microscope. 1 ml of sterile distilled water is inoculated with a loopful of the cross, and glusalase (Dupont/NEN) is added to a final concentration of 0.5%. The mixture should be incubated overnight at 25-29°C or for at least 6 hours at 29°C. Glusalase is a crude snail gut enzyme that breaks down the ascus wall and kills vegetative cells. Between 200-1000 spores/plate can be plated out on YES Agar or selective medium. The plates are then incubated at an appropriate temperature until colonies form.
抗体について
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2010-09-21 (火) 00:00:00