pombe.png

分裂酵母情報

分裂酵母の研究で必要な基礎情報をのせます。

菌株について

株の名前遺伝子型由来など入手日
Sp286h+/h+ ade6-M210/ade6-M216*1 ura4-D18/ura4-D18*2 leu1-32/leu1-32BIONEER, 破壊株コレクションホスト2007.10
972hh-千葉大学松浦氏, 野生株2006.8
FY254h- ura4-D18 leu1-32 ade6-M210 can1-1ATCC2007.8
FY7652h- leu1-32 ura4-D18NRBP2006.11
FY7549h- leu1 ura4NRBP2006.11
FY6955h- leu1 ura4-D18NRBP2006.11
FY7054h+N ade6-M210 his5-303 leu1-32 lys1-131 ura4-D18NRBP2006.11
OM2h- leu1-32千葉大学松浦氏2006.8
JY741h- ura-D18 leu1 ade6-M216千葉大学松浦氏, growthが遅い2006.8
JY746h+ ura-D18 leu1 ade6-M210千葉大学松浦氏2006.8


プラスミドについて

Pombeのプラスミドについて、Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology PartAのPombeの章やこのForsburgのページと文献1*3に書いてあることをまとめると、

複製起点と安定性について

  • 出学酵母の2ミクロンDNAは使えるが、安定に保持されない(脱落する)。
  • Pombeのars1を持つプラスミド(pSP2など)の方がすこし安定に保持される*4
  • stbというよくわからないDNA elementを持つプラスミド(pFL20) はかなり安定に保持される*5
  • ars3002をタンデムに持ったプラスミド(pDblet)はかなり安定に保持される*6

多量体化について

  • pDbletは2量体が多少見られる、pFL20は多量体は見られない、pSP2は多量体化することがある*7

マーカー遺伝子について

  • Sc_LEU2Sp_leu1をよわく相補
  • Sc_URA3Sp_ura4をとても弱く相補
  • ura4-DS/E*8
    ura4-DS_E.png
  • ura4D-18*9
    ura4-D18.png

プロトコル

  • ランダムスポア解析 The RSA protocol is simple: Using a three day old cross check for the presence of asci under the light microscope. 1 ml of sterile distilled water is inoculated with a loopful of the cross, and glusalase (Dupont/NEN) is added to a final concentration of 0.5%. The mixture should be incubated overnight at 25-29°C or for at least 6 hours at 29°C. Glusalase is a crude snail gut enzyme that breaks down the ascus wall and kills vegetative cells. Between 200-1000 spores/plate can be plated out on YES Agar or selective medium. The plates are then incubated at an appropriate temperature until colonies form.

抗体について

 

酵母の情報のページへ

2010-09-21 (火) 00:00:00

*1 ade6のアリルに関してはForsburgのページを参照
*2 ura4-D14は完全欠失(リアルタイムPCRの結果, ura4-D14を作成した論文
*3 文献1 Brun C, Dubey DD, Huberman JA., pDblet, a stable autonomously replicating shuttle vector for Schizosaccharomyces pombe., Gene. 1995 Oct 16;164(1):173-7.
*4 Mitotic stability 30%, copy number 0.5, 文献1より
*5 Mitotic stability 62%, copy nunber 5, 文献1より
*6 Mitotic stability 73%, copy nunber 6, 文献1より
*7 文献1より
*8 Nakagawa H, Lee JK, Hurwitz J, Allshire RC, Nakayama J, Grewal SI, Tanaka K, Murakami Y., Fission yeast CENP-B homologs nucleate centromeric heterochromatin by promoting heterochromatin-specific histone tail modifications., Genes Dev. 2002 Jul 15;16(14):1766-78.
*9 Grimm C, Kohli J, Murray J, Maundrell K., Genetic engineering of Schizosaccharomyces pombe: a system for gene disruption and replacement using the ura4 gene as a selectable marker., Mol Gen Genet. 1988 Dec;215(1):81-6.