酵母実験プロトコル

 

酵母の形質転換（LiOAc法）

酵母の形質転換
宿主細胞を用意（10^7-10^8cells/mL を 1mL/tube使用）*1
↓　10,000rpm 1min（チビタン）
水か0.1M LiOAcで細胞を洗う
↓　10,000rpm 1min（チビタン）
下記のものを加える
50% PEG4000240µL
1M LiOAc36µL
2mg/mL ssDNA*225µL
切ったベクター*31-2µL
PCR product*345µL
↓
RT 30min
↓
42℃ 20min
↓　卓上のチビタンで数秒、遠心
上清を除き、水や培地を50µL加え、選択培地にやさしく播く
 
  • *1 : O/Nカルチャーを適当に薄め、YPDで数時間培養する。OD600=1程度になったら細胞を回収する。
  • *2 : Salmon testes DNAを2mg/mLで水に溶かし、100℃5分 → 急冷したもの。
  • *3 : 両者をあわせて50µLにする。水で調整する。
     
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使う試薬のメーカー、型番

  • PEG4000　和光一級　162-09115
  • LiOAc　和光特級　127-01545
  • Salmon testes DNA　Sigma　D1626-10G