酵母実験プロトコル

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Gap-Repair Cloningに関係するプロトコル・試薬・生物材料などを掲載しています。

培地†

• 完全培地（YPD）：：形質転換に用いる酵母株の培養等に用います。
• 合成培地（SC-Ura）：プラスミドが導入された酵母の株の選択に用います。SC-Ura培地は、URA3をマーカーとして持つプラスミドを持つ酵母株の選択に用います。

株とプラスミド†

• BY4741（出芽酵母の標準株）：NBRP-yeastよりBY23849として入手できます。
• pRS426（出芽酵母の標準的プラスミド）：NBRP-yeastより BYP7841として入手できます。塩基配列は出芽酵母のプラスミドベクター（その２）を御覧ください。

プロトコル†

• クローニングにつかうDNAは大腸菌からアルカリ法で生成したもの、もしくはKOD-plus-NEO等のハイ・フィデリティ酵素で増幅したPCR産物
• 酵母の形質転換（LiOAc法）
• 酵母からのプラスミド回収（KOAc法）
• 酵母のコロニーPCR

ソフトウェア†

• ApE ：MacでもWindowsでも使えるフリーのプラスミド構築支援ソフトです。

参考書籍†

• バイオ実験イラストレイテッド〈7〉使おう酵母できるTwo Hybrid
• Methods in Yeast Genetics 2005

最終更新
2014-05-21 (水) 10:59:44